Recambios para el Tissue Kit Culture | Athena

Descripción

Recambios para las herramientas más importantes del Tissue Kit Culture para su uso en Cultivo de tejidos (Tissue culture) de Athena

• 1x Recipiente de mezcla (250 ml)
• 1x Botella de alcohol en spray
• 2x Botellas Químicas
• 1x Superficie de trabajo
• 1x Quemador de Alcohol

Procedimientos Culture Line – PASO 1: PREPARACIÓN DE LOS MEDIOS – Tissue Kit Culture

• 1A. Vierta un paquete de 125 ml de medio en polvo para brotes-Athena Shoots o raíces-Athena Roots (M) en el recipiente de 250 ml. recipiente de medios.
• 1B. Vierta agua filtrada (W) en el recipiente de medios hasta 125 ml y cierre la tapa.
• 1C. Agite el recipiente del medio hasta que la solución se disuelva por completo.
• 1D. Coloque la cantidad deseada de recipientes de cultivo y el recipiente de medio en el Autoclave por un ciclo completo.
• 1E. Limpiar y esterilizar la zona de trabajo de Flow Hood con alcohol. toallitas (superficies interior y frontal).
• 1P. Coloque los artículos del Autoclave del Tissue Kit Culture directamente debajo de la campana de flujo y déjelos enfriar. hasta aproximadamente 113° – 130°F o tan pronto como sea posible para manipularlo.
• 1G. Antes de que la solución se convierta en gel, llene cada recipiente de cultivo Culture Vessel hasta ¼ de su capacidad con la solución de medio (M) y tápelo.
• 1H. Deje que los recipientes de cultivo Culture Vessel se asienten hasta que el medio se convierta en un gel.
• 1I. Vuelva a colocar los recipientes de cultivo en la caja de herramientas de Flow Hood o en un lugar fresco y oscuro.

Procedimientos Culture Line – PASO 2: PREPARACIÓN DE LA PLANTA – Tissue Kit Culture

• 2A. Coloque un corte apical tomado de mamás limpias y sanas sobre una superficie de trabajo esterilizada. en la zona de trabajo y retirar el material foliar con un bisturí esterilizado.
• Nota: Estos pueden ser superiores, inferiores o medios. Un material más sano producirá mejores resultados.
• 2B. Diseccione el esqueje en el medio de cada entrenudo dejando suficiente tallo debajo. cada nodo para entrar en los medios.
• 2C. Coloque todos los nodos en un recipiente utilitario esterilizado y llénelo con 8 oz de líquido filtrado. agua (W).
• 2D. Envuelva las pinzas, el bisturí, la toalla de papel y la superficie de trabajo en aluminio. y reúna (2) recipientes de servicios públicos, cada uno lleno con 8 oz de agua filtrada para colocar en el Autoclave durante un ciclo completo.
• 2E. Limpie y esterilice la zona de trabajo con toallitas con alcohol (superficies internas y frontales).
• 2F. Coloque los artículos del Autoclave en la zona de trabajo junto con la utilidad esterilizada. Vaso lleno de nodos.
• 2G. Agregue 0,5 ml de Cleanse (C) y agite la mezcla durante 15 segundos.
• 2H. Abra ligeramente la tapa para verter la solución Cleanse (C) en un contenedor de residuos sin caída de nodos. Nota: El contenedor de residuos se mantiene fuera de la zona de trabajo.
• 2I. Utilice el recipiente Utility Vessel del Autoclave del Tissue Kit Culture para rellenar el recipiente utilitario que contiene los nudos con 8 oz de agua, agregue 20 mL de Lejía (B), agite la mezcla y dejar reposar 10min en la zona de trabajo.
• 2J. Abra ligeramente la tapa para verter la solución de blanqueador (B) en un contenedor de residuos sin caída de nodos. Nota: El contenedor de residuos se mantiene fuera de la zona de trabajo.
• 2K. Utilice el recipiente Utility Vessel del Autoclave del Tissue Kit Culture para rellenar el recipiente utilitario que contiene los nudos con 8 oz de agua (W).
• 2L. Agite el recipiente Utility Vessel y vierta el agua en un contenedor de desechos como enjuague final.

Procedimientos Culture Line – PASO 3: PREPARACIÓN DE LABORATORIO – Tissue Kit Culture

• 3A. Limpie y esterilice la zona de trabajo con toallitas con alcohol (superficies internas y frontales).
• 3B. Rocíe alcohol para esterilizar los recipientes de cultivo con medios Shoots y el alcohol. quemador antes de colocarlos en la zona de trabajo.
• 3C. Abra ligeramente el recipiente utility vessel utilitario con esquejes, retire un nudo con esterilizado. fórceps y colóquelo sobre la superficie de trabajo esterilizada.
• 3D. Mientras sostiene firmemente el nódulo con unas pinzas, disecciónelo por el extremo inferior, dejando suficiente tallo para entrar en los medios.
• 3E. Abra ligeramente el recipiente de cultivo Culture Vessel y coloque el tejido expuesto del ganglio en el medio. y cierre la tapa de inmediato. Esto es ahora un explante. Nota: Asegúrese de que las herramientas no toque los medios ni los recipientes de cultivo Culture Vessel
• 3F. Esterilice las pinzas y la hoja del bisturí con el mechero de alcohol después de cada corte.
• 3G. Rocíe la superficie de trabajo con alcohol después de cada corte.
• Nota: Repita los pasos D-G para cada explante que desee crear.
• 3H. Cuando todos los recipientes de cultivo Culture Vessel estén preparados con los explantes recién creados, guárdelos en una luz clonada a 75-125 PPFD y temperatura ambiente de 68 – 78°F

Procedimientos Culture Line – PASO 4: TRANSFERENCIA – Tissue Kit Culture

• 4A. Envuelva las pinzas, el bisturí, la superficie de trabajo y la toalla de papel en papel de aluminio para colocarlos. en el Autoclave durante un ciclo completo.
• 4B. Limpie y esterilice la zona de trabajo de Flow Hood con toallitas con alcohol (superficies internas y frontales).
• 4C. Utilice el rociador de alcohol para esterilizar todos los recipientes de cultivo llenos de Athena Roots/Athena Shoots. fórmula, los vasos con explantes y el mechero de alcohol antes de colocarlos en la zona de trabajo.
• 4D. Coloque los artículos del Autoclave directamente debajo de la Campana de Flujo.
• 4E. Retire un explante que muestre un nuevo crecimiento prominente de los recipientes de cultivo Culture Vessel de Athena Shoots. y colóquelo sobre la superficie de trabajo.
• Nota: Asegúrese de que las herramientas no toquen los medios ni los recipientes Culture Vessel.
• 4F. Diseccionar el explante en el medio de cada entrenudo dejando suficiente tallo debajo de cada nodo para entrar en los medios.
• 4G. Si el objetivo es preservar el material genético: Coloque el esqueje en un recipiente Culture Vessel. con medios de Athena Shoots.
• 4H. Si el objetivo es crear una planta madre: coloque el esqueje en un recipiente Culture Vessel. con medios Athena Roots.
• 4I. Esterilice las pinzas y la hoja del bisturí con el mechero de alcohol después de cada corte.
• 4J. Rocíe la superficie de trabajo con alcohol después de cada corte.
• Nota: Repita los pasos 4E-4J para cada explante disecado.
• 4K. Cuando todos los recipientes de cultivo estén preparados con los explantes recién creados, guárdelos en una luz clonada a 75-125 PPFD y 68-78°F de temperatura ambiente.

Descargar Guía Procedimiento Cultivo de tejidos (Tissue culture) (PDF)

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